Biološke značajke mezenhimskih matičnih stanica umnoženih in vitro u mediju s lizatom ljudskih trombocita

disertacija

• Naslov (engleski): Biological properties of mesenchymal stem cells expanded in vitro in medium with human platelet lysate
• Autor: Marijana Škifić
• Mentor: Radovan Vrhovac (mentor)
• Mentor: Mirna Golemović (komentor)
• Član povjerenstva: nije dostupno (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Medicinski fakultet; Zagreb
• Datum i država obrane: 2019-02-12, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOMEDICINA I ZDRAVSTVO; Kliničke medicinske znanosti
• Univerzalna decimalna klasifikacija (UDC): 61 - Medicina

Sažetak

Mezenhimske matične stanice (MMS) su nekrvotvorne multipotentne stanice koje imaju
svojstvo samoobnavljanja i sposobnost diferencijacije u tkiva mezenhimskog podrijetla.
Zahvaljujući svojim imunomodulatornim svojstvima, imunoprivilegiranosti te parakrinom
djelovanju, MMS su do danas najviše korištene u liječenju hematoloških stanja i raznih
poremećaja imunološkog sustava. Klinička primjena MMS zahtijeva njihovo prethodno
umnažanje u kulturi in vitro. Protokoli različitih istraživačkih i kliničkih skupina razlikuju se
u pogledu tkivnih izvora i metoda izolacije MMS, te uzgojnih uvjeta in vitro, što otežava
interpretaciju i usporedbu rezultata.
Cilj rada bio je istražiti utjecaj lizata trombocita (LT) na biološke značajke MMS tijekom
uzgoja in vitro, te ih usporediti sa značajkama stanica uzgajanih u prisustvu tradicionalno
korištenog fetalnog goveđeg seruma (FBS) čija primjena u staničnim pripravcima predstavlja
opasnost prijenosa uzročnika bolesti i imunizacije primatelja.
Rezultati su pokazali da stanice uzgajane u prisustvu LT i FBS ispoljavaju imunofenotip
karakterističan za MMS te imaju usporediv klonogeni potencijal i diferencijacijski kapacitet.
Istovremeno, kinetika rasta MMS je značajno veća u prisutvu LT, što se očituje u većem broju
udvostručenja stanične populacije u kraćem vremenu. Koncentracija LT u uzgojnom mediju
također je utjecala na kinetiku rasta te je rast stanica u svim ciklusima presađivanja bio
statistički značajno bolji u mediju s 10% LT u odnosu na uvjet s 5% LT. Stanice umnožene u
prisustvu 10% LT zadržavaju imunomodulatorna svojstva te inhibiraju proliferaciju
mitogenom aktiviranih limfocita za prosječno 66,9%. Stanice kod kojih su utvrđene
kromosomske promjene tijekom uzgoja u mediju s LT nisu imale selektivnu prednost i nisu se
održale u kulturi.
Zaključno, ovo istraživanje potvrđuje da bi zamjena FBS-a s LT u mediju za uzgoj MMS in
vitro omogućila dobivanje klinički značajnog broja MMS u kraćem vremenu uz istovremeno
očuvanje svih funkcijskih značajki stanica. Istovremeno, ovo istraživanje čini osnovu za
razvoj kliničkog protokola umnažanja MMS u mediju s LT cime bi se doprinijelo sigurnosti i
kvaliteti staničnih pripravaka. Optimizacija uzgojnih uvjeta opisana u ovom istraživanju
dodatni je doprinos standardizaciji metoda i uvjeta uzgoja MMS in vitro i napretku u ovom
znanstveno-kliničkom području.

Sažetak (engleski)

Mesenchymal stem cells (MSC) are nonhematopoietic multipotent cells that can differentiate
into tissues of mesodermal origin. Due to their ability to induce immunological tolerance in
the recipient, MSC have been utilized in the treatment of various hematological and immuneand
inflammation-mediated diseases. The clinical application of MSC implies prior in vitro
expansion that usually includes use of fetal bovine serum (FBS) which is associated with a
risk of transmitting infectious agents and immunizing events. Furthermore, the varied tissue
sources, methodologies of cell preparations and culture conditions used by different MSC
research and clinical groups resulted in ambiguities and inconsistencies in this field.
Aim of this study was to evaluate the effect of platelet lysate (PL) on biological properties of
MSC expanded in vitro in comparison to the FBS culture condition.
The results showed that the cells cultured in different conditions had comparable
imunophenotype, clonogenic potential and differentiation capacity. However, MSC growth
was significantly enhanced in the presence of PL, which was demonstrated by higher number
of cumulative population doublings (CPDs) and shorter population doubling time (PDT).
Furthermore, MSCs cultured in the presence of PL were able to cause a 66.9% reduction of
mitogen-induced lymphocyte proliferation. Chromosome aberrations observed in the PL
condition were transient and did not have selective advantage in the culture system.
In conclusion, this research confirmed that substitution of FBS in the MSC expansion media
with PL would enable the yield of clinically relevant numbers of MSC within shorter time
period and improve safety and quality of the cell products.

• Ključne riječi: medicina
• Ključne riječi (engleski): medicine
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:105:051328
• Studijski program: Naziv: Biomedicina i zdravstvo; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: poslijediplomski doktorski; Akademski / stručni naziv: doktor/doktorica znanosti, područje biomedicine i zdravstva (dr. sc.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Opseg: 78 str.
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup
• Datum i vrijeme pohrane: 2023-05-05 08:28:49