Unos i učinci genskih preinaka posredovanih lentivirusnim vektorom u mišjem mozgu

disertacija

• Naslov (engleski): Application and effects of gene modifications mediated by a lentviral vector in the mouse brain
• Autor: Laura Skukan
• Mentor: Srećko Gajović (mentor)
• Član povjerenstva: Željka Krsnik (predsjednik povjerenstva)
• Član povjerenstva: Dubravka Švob Štrac (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Nataša Jovanov Milošević (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Dinko Mitrečić (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Goran Sedmak (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Medicinski fakultet; Zagreb
• Datum i država obrane: 2024-04-16, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOMEDICINA I ZDRAVSTVO; Temeljne medicinske znanosti; Neuroznanost
• Univerzalna decimalna klasifikacija (UDC): 61 - Medicina

Sažetak

Unos genetskog materijala i genskih preinaka važan je pristup za proučavanje i liječenje genetskih i drugih bolesti. Lentivirusni vektori ističu se kao dominatan sustav dostave u ciljane stanične linije središnjeg živčanog sustava. Glavni cilj ovog istraživanja bio je utvrditi transdukciju neurona i astrocita za njih specifično dizajniranim lentivirusnim vektorom, procjeniti uzrokuje li dostavljen sustav shRNA utišavanje gena Spry2 te utvrditi učinak utišavanja gena Spry2 nakon izazivanja ishemijskog moždanog udara u mišjem modelu. Potvrđena je uspješna transdukcija stanica lentivirusnim vektorom te je analizom kolokalizacije pokazano da lentivirusni vektori s ovojnicom VSV-G transduciraju neurone dok Tet regulirani lentivirusni vektori sa specifičnim promotorom za astrocite i ovojnicom Mokola transduciraju astrocite. Procjenom aktivacije mikroglije i receptora TLR2 pokazano je da unos lentivirusnog vektora uzrokuje kratkotrajnu aktivaciju upalnog odgovora koja je ograničena na područje unosa. Analizom genske ekspresije potvrđeno je utišavanje gena Spry2 u injektiranim regijama mišjeg mozga. Međutim, njegova smanjena ekspresija nije pridonijela značajnom smanjenju volumena ishemijske lezije i funkcionalnom oporavku nakon ishemijskog moždanog udara. Ovo istraživanje potvrdilo je da su primjenjene strategije dizajna lentivirusnih vektora učinkovit sustav dostave koji omogućava ograničenu transdukciju stanica od interesa i uspješno utišavanje gena Spry2.

Sažetak (engleski)

The delivery of genetic material or gene modification is an important approach for the study and treatment of genetic and other diseases. Lentiviral vectors are a dominant delivery system to target cell lines of the central nervous system. The aim of this study was to determine the transduction of target cells with a specifically designed lentiviral vector for the neuron and astrocyte transduction, to assess whether the delivered shRNA system causes silencing of Spry2, and to examine the effect of Spry2 silencing after ischemic stroke induction in a mouse model. Successful cell transduction with the lentiviral vector was confirmed, and colocalization analysis confirmed that VSV-G pseudotyped lentiviral vectors transduce neurons, while Tet-regulated Mokola pseudotyped lentiviral vector with astrocyte-specific promoter transduce astrocytes. Furthermore, lentiviral vector causes a short-term activation of the inflammatory response, which was restricted near the area of injection site. Silencing of the Spry2 was confirmed in the injected regions of the mouse brain. However, downregulation of Spry2 did not reduced the volume of ischemic lesion and contribute to the functional recovery after ischemia. This study confirmed that the applied design strategies of lentiviral vector are an efficient delivery system that allows restricted transduction of cells of interest and successful Spry2 silencing.

• Ključne riječi: Miševi; Astrociti; Moždani udar; Stanična linija; Neuroni; Mozak; Središnji živčani sustav; Ishemija; RNA; mala interferencija
• Ključne riječi (engleski): Mice; Astrocytes; Ischemic Stroke; Cell Line; Neurons; Brain; Central Nervous System; Ischemia; RNA; Small Interfering
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:105:277371
• Projekt: Šifra: KK.01.1.1.04.0085; Naziv: Genomsko inženjerstvo i genska regulacija u staničnim linijama i modelnim organizacijama tehnologija CRISPR / Cas9 CasMouse; Naziv: Genomic engineering and gene regulation in the cell lines model organisms CRISPR / Cas9 CasMouse technology; Kratica: CRISPR/Cas9-CasMouse; Voditelj: Srećko Gajović; Pravna nadležnost: Hrvatska; Financijer: EK; Linija financiranja: EFRR
• Studijski program: Naziv: Neuroznanost; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: poslijediplomski doktorski; Akademski / stručni naziv: doktor/doktorica znanosti, područje biomedicine i zdravstvo (dr. sc.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Opseg: 120 str.
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Rad dostupan nakon; Datum isteka embarga: 2025-04-17
• Datum i vrijeme pohrane: 2024-04-19 10:57:13